胎牛血清是細胞培養中zui重要的元素之一。下面是小編自己具體總結
胎牛血清的一些經(jīng)常會(huì )遇到的問(wèn)題解決方案,以作為參考,希望能夠幫助到大家。
1、保存血清的方法?
我們建議胎牛血清應保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,建議您無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2、如何解凍胎牛血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將胎牛血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。
3、胎牛血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白在血清解凍后,也會(huì )存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會(huì )阻塞您的過(guò)濾膜。
4、為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養ES細胞,昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
5、有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì )使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái),不但節省您寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會(huì )出現沉淀?
GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預老化,儲存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。這應該不會(huì )影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。
7、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時(shí)候,注意下列的操作: • 解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法,若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì )變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )造成沉淀物的增多。
8、如何評估ES細胞合格的胎牛血清?
使用D3 ES細胞。這是一個(gè)對于胎牛血清中生長(cháng)促進(jìn)、生長(cháng)抑制和分化因子非常敏感的細胞系。
相關(guān)生長(cháng)效率分析:
當ES細胞以非常低的密度傳入包含10%胎牛血清的生長(cháng)培養基中,檢測啟動(dòng)和支持ES細胞克隆的能力。
細胞毒分析:當以非常低的密度傳入包含30%胎牛血清的生長(cháng)培養基中,檢測ES細胞和feeder細胞的生長(cháng)能力。
相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析:檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過(guò)堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅,分化的細胞較大,豐滿(mǎn),顏色較淺。所有的分析在沒(méi)有ESGRO的情況下進(jìn)行,培養基中出現ESGRO會(huì )掩蓋由胎牛血清所導致的問(wèn)題。培養發(fā)現大約8批血清中有1批可以用來(lái)培養ES細胞。