ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。
實(shí)驗顯示，ELISA試劑盒經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對細胞的生長(cháng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長(cháng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多，人正常肝細胞這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，納米PCR試劑盒而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析ELISA試劑盒操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。
實(shí)驗中為了確定信號和背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實(shí)驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規提供的范圍進(jìn)行操作。
標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說(shuō)明書(shū)中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
一般待測抗原標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍的可通過(guò)將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml?？衫脴藴实?strong>ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標準品和標本。若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
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